В последние годы генетические исследования растений, в частности ячменя, становятся все более актуальными. Одним из наиболее перспективных направлений является создание мутантных популяций с использованием методов мутагенеза. Мы провели исследование, в ходе которого удалось получить гомозиготную мутантную популяцию ячменя, объединив культуру микроспор и EMS-индуцированный мутагенез. Данное исследование открывает новые горизонты в селекции и генетике ячменя, а также имеет значительные практические применения.
Методология исследования
Для начала, мы осуществили мутагенез микроспор в двух различных генотипах ячменя, применяя различные концентрации этилметансульфоната (EMS). Этот химический мутаген известен своей способностью вызывать точечные мутации в ДНК, что делает его идеальным инструментом для генетических манипуляций. После обработки микроспор, мы секвенировали геномы регенерированных растений, что позволило выявить генотип- и дозозависимое влияние на эффективность регенерации мутагенизированных линий DH (двойных гомозигот).
Семена до обработки EMS были обозначены как M0, а семена после обработки — как M1. Растения M1 оказались гетерозиготными по мутагенным локусам, что создало основу для дальнейшего создания популяций мутантов. Для получения гомозиготных семян с устойчивыми фенотипическими изменениями требуется несколько циклов самоопыления. Однако стоит отметить, что в поколениях M3 и последующих могут возникать летальные или стерильные эффекты, что представляет собой значительную проблему для селекционеров.
Преимущества культивирования микроспор
Культивирование микроспор предоставляет уникальную возможность получать регенерированные растения, которые гомозиготны по каждому генетическому локусу. В процессе работы мы добавляли химические мутагены в суспензию микроспор или индукционную среду, что способствовало получению более стабильных и предсказуемых результатов. Проростки M1, полученные в результате данного процесса, были гомозиготными, что позволило использовать их листья для извлечения ДНК, а семена (M2) — для фенотипирования.
Результаты и их значение
В ходе нашего исследования мы получили семена 1873 линий DH от генотипа Hua30 и 99 от HTX, которые содержали нуклеотидные мутации. Эти линии представляют собой ценный ресурс для дальнейшего фенотипирования различных признаков, что может быть использовано для улучшения селекционных программ.
Для оценки гаметоклональных вариаций была рассчитана частота мутаций в масштабе всего генома, которая составила 1,84 мутации на мегабазу (Мб) для Hua30 и 1,23 мутации на Мб для HTX. Более 50% мутаций были связаны с переходом G/C в A/T, что может указывать на специфические механизмы мутагенеза, действующие в этих генотипах. Интересно, что частота мутаций в кодирующих областях была ниже, чем в целом геноме, что подчеркивает высокую устойчивость этих участков к мутациям.
Заключение
Таким образом, наше исследование продемонстрировало эффективность комбинированного подхода, включающего культуру микроспор и EMS-индуцированный мутагенез, для создания гомозиготных мутантных популяций ячменя. Полученные результаты открывают новые возможности для селекции и генетического улучшения ячменя, что, в свою очередь, может привести к повышению урожайности и устойчивости к различным стрессовым факторам. В будущем необходимы дальнейшие исследования для более глубокого понимания механизмов мутагенеза и их применения в агрономии.
Полный вариант статьи:
aBIOTECH
Исследование гомозиготных мутантных популяций ячменя: достижения и перспективы
